NEWGEORGE Cell Cycle Detection Kit

操作步骤

1. 试剂耗材准备

细胞完全培养基，PBS，Trypsin Solution，6孔板，PI染液，RNase A

2. 细胞收集

细胞培养至48h后，常规胰酶消化， PBS洗2-3次，制成单细胞悬液，并调整细胞数量至1-5×106 cells/ml。

3. 细胞固定

a. 加入1ml 预冷PBS重悬细胞，1000 rpm×5 min，吸净上清。

b. 加入500ul PBS，轻轻重悬细胞，使细胞分离为单个，逐滴加入预冷的100% 乙醇（-20℃）1.5 ml，使其终浓度为70% ，4℃，放置过夜固定。

4. 细胞标记

a.  取出固定的样品，1000 rpm×5 min，弃上清。

b. 加入1ml预冷PBS重悬细胞，1000 rpm×5 min，离心收细胞。重复1次，以除去乙醇，可用300目滤网过滤，样品浓度调至1-10×105 cells/ml。

c. 加入150 ul RNaseA（250-500 ug/ml PBS稀释）重悬细胞，37℃消化30分钟。

d. 加入100 ul PI工作液，4℃避光染色30分钟。

5. 转至流式检测管，上机检测

PI用488nm氩离子激光器激发，由630带通滤光片接收，通过FSC/SSC散点图收集细胞，采用设门技术排除粘连细胞和在碎片，分析PI荧光直方图上细胞各周期的百分率。

注意事项
1  本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。 

2  荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
3 碘化丙啶对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。
4 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

5 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。